Development of Kidney Epithelial Cell derived from Cas9 Expressing Pig

CRISPR/Cas9를 이용한 유전자 편집 기술은 동물 모델 제작 등 다양한 생명과학 분야에서 활용되고 있으나, 여러 요인에 의해 효율이 저하되는 문제점도 있다. Cas9 발현 돼지의 신장 상피세포를 분리해 활용하면 원하는 유전자에 gRNA만 도입하여 손쉽게 질병 모델 제작 등 폭넓은 연구가 가능할 것이다. 본 연구에서는 Cas9을 발현하는 돼지의 신장 상피세포를 분리하여 특성을 분석하고 gRNA 도입을 통해 유전자 편집 연구에 활용 가능성을 평가하였다. Cas9을 발현하는 2개월령 수퇘지의 신장을 길이가 1mm 이내가 되도록 잘게 자른 후 콜라겐분해효소IV를 넣고 37℃ 배양기에서 반응시켜 세포를 확보하였다. 상피세포는 CD29 및 E-cadherin 항체를 활용하여 FACS로 분리하였다. 두 항체에 양성인 세포만 선별하여 pEF를 대조군으로 상피세포 마커 발현을 분석한 결과, E-cadherin, EpCAM 및 KRT 19의 발현이 대조군에 비해 높게 나타났으며, 면역형광염색 분석 결과에서도 E-cadherin, EpCAM, KRT 5/14/19가 강하게 발현하는 것을 확인하였다. 돼지에 내재된 tdTomato 유전자의 gRNA 도입을 통해 편집이 가능함을 확인하였다.