Investigation of the suspected methyltransferases from ORF80 and 82 of φCh1, a virus of the haloalkaliphilic archaeon N. magadii

φCh1 ist ein temperenter Kopf-Schwanz-Virus, welcher N. magadii als einzigen bekannten Wirt verwendet. Der Wirt N. magadii, der im Sodasee Magadi beheimatet ist, lebt dort unter extremen Bedingungen, mit hohem pH-Wert und Salzgehalt und hat sich an diese Umgebung angepasst, was dieses Virus-Wirtspaar einzigartig und daher zu einem interessanten Studienobjekt macht. Viele Aspekte der Wechselwirkungen von φCh1 und N. magadii sind derzeit unbekannt oder nicht vollständig geklärt, so auch die Funktion der Open Reading Frames 80 und 82. Frühere Studien, die eine Sequenzanalyse und Vergleich durchführten, deuten darauf hin, dass es sich bei beiden ORFs wahrscheinlich um DNA-Methyltransferasen handelt, genauer bei ORF80 um eine m5C-mtase und bei ORF82 um eine m4C-mtase. Bei einem weiteren ORF, ORF94, wurde bereits bestätigt, dass es sich um eine Methyltransferase handelt, die eine wichtige Rolle bei der Regulation des viralen Lebenszyklus spielt. So wie ORF94 untersucht wurde, wurden nun auch in dieser Arbeit die Funktionen von ORF80 und ORF82 in φCh1 analysiert. Um dies zu erreichen, wurden erst Deletionsmutanten des lysogen infizierten Stammes von N. magadii, L11, erzeugt, indem jeweils einer oder beide ORFs durch eine Novobiocin-Resistenzkassette ersetzt wurden. Diese Deletionsmutanten wurden dann komplementiert, indem sie mit einem Plasmid transformiert wurden, welches die deletierten ORFs trug. Zusätzlich wurden Überexpressionsvarianten von L11 durch Transformation von regulärem L11 mit den Komplementationsplasmiden. erzeugt. Alle diese Konstrukte wurden dann hinsichtlich ihres Wachstumsverhaltens, ihres Virustiters und ihrer Produktionsmuster bestimmter Proteine von φCh1 verglichen.