Effect of pro-resolving therapeutic cells on human fibroblast in pressure sores : importance in chronic wound healing

Introduction : Les escarres se traduisent par des lésions tissulaires ischémiques causées par une pression prolongée. Les thérapies conventionnelles sont souvent insatisfaisantes et la recherche fondamentale sur la cicatrisation des escarres doit être approfondie. Dans ce contexte, les thérapies cellulaires basées sur les cellules pro-résolutives de l'inflammation, telles que les cellules stromales issues du tissu adipeux (ADSC) et les macrophages pro-résolutifs M2Mφ, sont en plein essor dans le domaine de la médecine régénérative. Nous nous concentrons sur les fibroblastes dermiques des escarres. Après avoir caractérisé le profil morphologique et génétique des fibroblastes sains et des fibroblastes issus d'escarres, nous avons mené une analyse de leur prolifération, migration et de différenciation myofibroblastique.L'étude du comportement cellulaire des tissus affectés par les escarres, à l'état basale et sous stimulation des thérapies susmentionnées, pourrait aider à comprendre si ces thérapies peuvent être prometteuses pour ces plaies chroniques.Matériel et méthodes : Le milieu conditionné d'ADSC est obtenu après isolement d'ADSC à partir de tissu adipeux sous-cutané issu de dermolipectomies abdominales (Chirurgie plastique, CHU de Toulouse). Pour la production de milieux conditionnés des macrophages pro-résolutifs M2Mφ, des monocytes ont été isolés à partir de cellules mononucléaires du sang périphérique (PBMC) obtenues à partir de concentrés leucocytaires (Établissement Français du Sang Occitanie). Les M2Mφ et les ADSC obtenus ont été cultivés seuls ou en coculture (CC). Après acquisition d'explants dermiques pathologiques et sains de patients souffrant d'escarres (Chirurgie plastique, CHU de Toulouse), une analyse histologique a été réalisée et les fibroblastes ont été extraits et cultivés. La RT-qPCR a été réalisée sur les gènes codant pour des protéines de la matrice extracellulaire, des métalloprotéases, des cytokines et des facteurs de croissance. La prolifération et la capacité de migration des fibroblastes ont été évaluées par IncuCyte. Une étude de la différenciation myofibroblastique par la détection de l'expression de l'alpha-actine du muscle lisse (α-SMA) a également été menée. Ces tests ont été réalisés à l'état basale et sous stimulation par les milieux conditionnés.Résultats : l'analyse histologique a montré une désorganisation structurale du derme des escarres et des différences morphologiques et de densité des fibroblastes d'escarre. Les fibroblastes d'escarres expriment moins de gènes codant pour des protéines de la matrice extracellulaire, des métalloprotéases, pour le facteur de croissance du tissu conjonctif et pour l'ACTA2 codant pour l'α-SMA. Les fibroblastes pathologiques semblent proliférer moins rapidement que les fibroblastes sains, mais aucune différence de capacité de migration n'a été constatée. Après stimulation par TGF-β, les fibroblastes d'escarres perdent leur capacité à se différencier en myofibroblastes par rapport aux fibroblastes sains. Nous avons évalué l'effet de quatre milieux conditionnés sur la prolifération des fibroblastes. Nos résultats montrent que le milieu conditionné M2Mφ stimule la prolifération des fibroblastes sains, tandis que les milieux conditionnés ADSC et CC ont un effet moindre sur leur prolifération. Le milieu conditionné M2-Mφ stimule également la prolifération et la migration des fibroblastes pathologiques, mais à un degré moindre que celui des fibroblastes sains. La différenciation myofibroblastique est stimulée sous l'effet du milieu conditionné M2-Mφ.[...]