Etude du rôle de l'interaction Leishmania - macrophage dans l'établissement des réponses immunitaires protectrices et permissives chez des modèles animaux résistants et sensibles

L'infection par Leishmania (L.) varie d'une atteinte asymptomatique à une immunopathologie dévastatrice. Bien que ces parasites prospèrent à l'intérieur des macrophages, le rôle de ces cellules immunitaires clés dans la détermination de l'issue de la maladie reste à établir. Pour explorer cette question, nous avons utilisé deux modèles expérimentaux de rongeurs décrits comme résistants (souris C57BL/6) ou sensibles (hamsters dorés) à l'infection par L. donovani. Nous avons d’abord établi un protocole de différenciation permettant de générer des macrophages dérivés de la moelle osseuse de hamster (hamBMDMs), et montré leur sensibilité accrue à la prolifération intracellulaire de L. donovani par rapport aux macrophages murins (mBMDMs). Ces observations suggèrent que l’interaction initiale parasite – macrophage joue un rôle déterminant dans l’issue de l’infection. Les analyses comparatives par RNAseq des hamBMDMs et mBMDMs, infectés ou non par L. donovani, ont révélé des différences à la fois dans leur profil d'expression intrinsèque et dans la réponse à l'infection. Les hamBMDMs présentent un biais vers une polarisation de type M2, anti-inflammatoire. Nous avons identifié des gènes candidats potentiellement associés à la susceptibilité chez les hamBMDMs, tels que le régulateur du cholestérol Srebf2, le facteur de transcription Cebpβ, ou encore l'enzyme pléiotrope Tgm2. À l'inverse, nous avons mis en évidence une série de gènes dont l'expression accrue est corrélée à la résistance à l'infection chez les mBMDMs, tels que la protéinase Ctsk, la kinase c-Src ou l'ARN long non codant Aw112010. Pour évaluer la fonction de ces gènes dans l'infection par Leishmania, nous avons mis en œuvre une stratégie de perte de fonction par siRNA. Cette approche s'est révélée efficace chez les mBMDMs mais a échoué chez les hamBMDMs pour des raisons encore inconnues. Nous avons donc utilisé une approche pharmacologique pour cibler les facteurs de susceptibilité présumés chez le hamBMDMs, en interférant avec le niveau de cholestérol ou avec l'activité de ARG1, TGM2 et CEBPβ. Les macrophages de souris et de hamster, respectivement traités par siRNA ou par inhibiteurs, ont ensuite été exposés à L. donovani pour évaluer une éventuelle inversion de leur phénotype de résistance ou de susceptibilité. Nous avons optimisé une méthode semi-automatisée de microscopie pour quantifier l'infection, et constaté que l'inhibition par siRNA chez les macrophages murins n'altérait pas la charge parasitaire. Chez les macrophages de hamster, les validations sont encore en cours, mais des résultats préliminaires indiquent qu'une déplétion en cholestérol par traitement médicamenteux pourrait nuire à la survie du parasite dans les macrophages. Dans l'ensemble, notre travail met en lumière le rôle central des facteurs intrinsèques aux macrophages dans l'issue de l'infection par L. donovani et ouvre la voie à de nouveaux gènes candidats potentiellement associés aux phénotypes de résistance ou de susceptibilité.