The role of the ubiquitin ligase TRIP12 in double-strand break repair : competitive interaction with MDC1 and development of quantitative colocalization tools

Les cassures double-brin de l'ADN (DSBs) représentent la forme la plus cytotoxique de dommage génomique, et leur réparation est étroitement contrôlée par la réponse aux dommages de l'ADN (DDR). Dans cette thèse, j'ai étudié le rôle de l'ubiquitine ligase E3 TRIP12 dans la régulation de la réparation des DSBs ainsi que dans la chimiorésistance des cellules cancéreuses pancréatiques.Nous avons montré que TRIP12 interagit directement avec le domaine BRCT tandem de MDC1 via sa région intrinsèquement désordonnée (IDR) N-terminale, de manière dépendante de la phosphorylation en sérine 77. Cette interaction compétitive interfère avec la reconnaissance de γH2AX par MDC1, compromettant ainsi l'accumulation de MDC1 et de ses effecteurs en aval, tels que 53BP1, aux sites de dommage. Bien que cet effet soit clairement observable dans des systèmes de surexpression, son impact physiologique dans les modèles de cancer pancréatique apparaît contextuel et n'est pas systématiquement associé à une sensibilité modifiée aux chimiothérapies.Afin d'analyser plus finement la dynamique des protéines de la DDR, j'ai développé un outil bioinformatique automatisé combinant macros Fiji et script Python, permettant de quantifier la colocalisation de foyers par approximation gaussienne. Cet outil détecte des variations subtiles d'efficacité de colocalisation, indétectables par les approches classiques, et m'a permis de caractériser les effets fins de l'expression de TRIP12 sur le recrutement de MDC1.Dans l'ensemble, ce travail met en évidence un mécanisme inédit de régulation de la DDR par TRIP12, souligne son rôle complexe et dépendant du contexte dans la survie des cellules cancéreuses pancréatiques, et propose un nouvel outil quantitatif pour l'étude de la colocalisation des protéines dans les voies de réparation de l'ADN.