归芍三甲汤调控肝星状细胞活化治疗肝硬化大鼠的机制研究

<sec> <title>目的</title> 通过观察归芍三甲汤调控肝星状细胞活化对肝硬化大鼠的影响，为该方治疗肝硬化提供理论支撑。 </sec> <sec> <title>方法</title> 44只SD大鼠中随机选取10只作为正常组，给予橄榄油溶液腹腔注射，其余大鼠给予等量40%四氯化碳-橄榄油溶液诱导肝硬化模型。验证造模成功后将大鼠随机分为模型组、归芍三甲汤低、中、高剂量组和水飞蓟宾组，每组6只。正常组和模型组给予生理盐水灌胃，西药组予水飞蓟宾水溶液灌胃，中药各剂量组分别分别按相应药量灌胃，每日2次，持续6周。观察并记录大鼠一般状态、体质量变化、肝脏形态、肝指数；采用苏木素-伊红（HE）和马松（Masson）染色观察肝脏病理形态改变；透射电镜观察肝组织超微结构；ELISA法检测大鼠血清肝纤四项HA、LN、C-Ⅳ和 PⅢNP的含量；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测肝组织Cox-2、GFAP、TGF-β1、α-SMA、COL1的mRNA表达水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肝组织Cox-2、GFAP、TGF-β1蛋白表达水平。 </sec> <sec> <title>结果</title> 肝硬化模型组大鼠体质量明显减轻，肝脏体积缩小，布满小结节，肝指数升高，病理染色可见肝组织大量纤维组织增生，假小叶形成，透射电镜下肝星状细胞明显水肿，突触伸长，脂滴减少，内质网扩张，可见胶原纤维形成。经中药各剂量干预后，大鼠体质量增加，肝脏体积增大，结节明显减少，病理结果显示肝细胞变性坏死程度减轻，纤维间隔变细，透射电镜可见肝星状细胞水肿减轻，脂滴丰富，粗面内质网扩张改善，未见明显胶原纤维。与正常组相比，模型组大鼠肝纤四项HA、LN、C-Ⅳ、PⅢNP水平升高（<italic>P</italic>&lt;0.05或<italic>P</italic>&lt;0.01），肝组织Cox-2、GFAP、TGF-β1、α-SMA、COL1的mRNA水平升高（<italic>P</italic>&lt;0.05），Cox-2、TGF-β1、GFAP的蛋白表达水平上升（<italic>P</italic>&lt;0.05或<italic>P</italic>&lt;0.01）。与模型组比较：中药低剂量组HA、LN、C-Ⅳ、PⅢNP水平降低（<italic>P</italic>&lt;0.05或<italic>P</italic>&lt;0.01），肝组织Cox-2、GFAP、TGF-β1、α-SMA、COL1的mRNA水平明显降低（<italic>P</italic>&lt;0.05或<italic>P</italic>&lt;0.01），Cox-2、GFAP、TGF-β1的蛋白表达水平显著下降（<italic>P</italic>&lt;0.05或<italic>P</italic>&lt;0.01）；中药中剂量组HA、C-Ⅳ水平降低（<italic>P</italic>&lt;0.05或<italic>P</italic>&lt;0.01），肝组织Cox-2、GFAP、TGF-β1、α-SMA、COL1的mRNA水平明显降低（<italic>P</italic>&lt;0.05），Cox-2、GFAP、TGF-β1的蛋白表达水平显著下降（<italic>P</italic>&lt;0.05或<italic>P</italic>&lt;0.01）；中药高剂量组HA、C-Ⅳ水平降低（<italic>P</italic>&lt;0.05或<italic>P</italic>&lt;0.01），肝组织GFAP、α-SMA、COL1的mRNA水平明显降低（<italic>P</italic>&lt;0.05或<italic>P</italic>&lt;0.01），Cox-2、GFAP的蛋白表达水平显著下降（<italic>P</italic>&lt;0.01）。 </sec> <sec> <title>结论</title> 归芍三甲汤可能通过抑制肝星状细胞活化发挥抗肝纤维化，改善肝硬化，这为提高临床疗效提供微观层面的客观思路及依据。 </sec>