Analyse du trafic vésiculaire et de la sécrétion de la chimiokine CCL2 dans les mastocytes après activation par le FceRI

Dans ce travail de thèse j'ai étudié le trafic vésiculaire conduisant à la sécrétion de la chimiokine CCL2 et d'une protéine de fusion CCL2-eGFP dans des mastocytes (MC) dérivés de progéniteurs de moelle osseuse ou de cellules péritonéales de souris de type sauvage (WT) ou transgéniques CCL2-eGFP, stimulés par leur récepteur de haute affinité pour l'IgE (Fc'RI). Les MC WT et CCL2-eGFP ont d'abord libéré la chimiokine préstockée, suivie d'une deuxième vague de sécrétion de CCL2 et CCL2-eGFP nouvellement synthétisées avec une cinétique comparable, bien que la protéine de fusion semble être sécrétée moins efficacement. Nos données montrent leur colocalisation partielle avec les endosomes de recyclage VAMP3+ et les endosomes tardifs VAMP7+ suggérant que ces endosomes sont des intermédiaires du trafic vésiculaire du CCL2 sécrété. En accord, la sécrétion de CCL2 est partiellement inhibée dans les MC VAMP7 KO. L'analyse dynamique du trafic vésiculaire de CCL2-eGFP a révélé un mode de sécrétion complexe et diversifié (multidirectionnel, polarisé ou type pseudopode) qui dépend de l'interaction étroite entre les cytosquelettes d'actine et des microtubules. Après sécrétion, la CCL2-eGFP interagit avec les protéoglycanes libérés par dégranulation. Dans une configuration de dégranulation polarisée, la libération précoce de la CCL2-eGFP se fait dans l'interface de dégranulation, et la sécrétion tardive de la CCL2 nouvellement synthétisée montre un trafic multidirectionnel principalement loin de l'interface de dégranulation. In vivo, lors d'une réaction anaphylactique cutanée passive IgE-dépendante, la CCL2 apparait au cours de la première vague de sécrétion dans la circulation alignée sur les vaisseaux probablement en se liant aux protéoglycanes endothéliaux, alors que pendant la deuxième vague la CCL2 sécrétée se retrouve également dans le tissu. Ces deux vagues pourraient jouer un rôle pour attirer au mieux les cellules inflammatoires localement à la fois au niveau vasculaire et tissulaire. Notre étude fournit de nouvelles informations sur la manière dont les MC organisent le site inflammatoire.