NOVOS ANÁLOGOS DE DEFERASIROX COMO AGENTES QUELANTES PARA O TRATAMENTO DE SOBRECARGA DE FERRO

A sobrecarga de ferro é uma complicação comum em indivíduos que recebem transfusões sanguíneas frequentes ou apresentam distúrbios genéticos do metabolismo do ferro, visto que não há forma natural da sua excreção. A terapia com quelante torna-se essencial e, embora três agentes estejam disponíveis, seu uso clínico é limitado pela necessidade de doses elevadas e pelos efeitos adversos. Terapias combinadas são mais eficazes que monoterapias, mas limitações farmacocinéticas e farmacodinâmicas evidenciam a necessidade de alternativas mais eficientes para serem somadas as já em uso. Assim, avaliamos novos análogos do deferasirox (DFX) quanto à capacidade de quelar ferro livre e intracelular e seus efeitos em camundongos com sobrecarga de ferro. A eficácia dos compostos foi avaliada por meio da fluorescência da calceína, que diminui com a sua ligação ao ferro e é restaurada com a remoção deles pelos quelantes. A capacidade de ligação ao ferro livre foi analisada pela adição de DFX ou de um dos compostos C1 e C4 (0,05–5µM) a uma solução contendo calceína e sulfato ferroso de diamônio. A recuperação da fluorescência foi monitorada por 2 horas. Para avaliação da quelação intracelular, células H9c2 foram carregadas com citrato férrico de amônio por 24 horas, incubadas com calceína-AM por 30 minutos e tratadas com os quelantes. A fluorescência foi medida por 2 minutos. No experimento in vivo, camundongos C57BL/6 machos foram alimentados com dieta 0,2% de ferroceno até a 18ª semana e tratados por gavagem com veículo, DFX, C1 ou C4. Os níveis séricos de ferritina foram quantificados (ELISA) e a deposição de ferro no fígado, baço, coração e aorta foi avaliada por coloração Azul de Prússia. A análise foi feita no software ImageJ para avaliar a área com deposição de ferro. Em concentrações elevadas, C1 demonstrou quelação rápida, comparável ao DFX, atingindo pico em 10 minutos. C4 apresentou atividade mais lenta, com aumento contínuo após 20 minutos. Ambos mostraram boa permeabilidade celular e removeram o ferro das células H9c2. Todos os quelantes atingiram platô em até 15 segundos, sugerindo rápida internalização e ação imediata. Na concentração de 1µM, C1 atingiu 118% da atividade do DFX, e C4 alcançou 108%. Após confirmação da atividade in vitro, os compostos foram analisados quanto à capacidade de reduzir níveis sistêmicos e teciduais de ferro em modelo animal. Resultados preliminares após 2 semanas mostraram tendência à redução da ferritina sérica no grupo tratado com C4 em comparação ao controle não tratado (20752 ± 221 vs. 27664 ± 4244 ng/ml). A análise histológica revelou tendência semelhante de redução do conteúdo de ferro hepático com C4 (78.8 ± 14.2 vs. 64.5 ± 4.2 µm2) e do ferro esplênico com DFX (32.2 ± 8,7 vs. 24.3 ± 3.6 µm2). Os demais tratamentos e órgãos não foram afetados. Os análogos de DFX mostraram-se eficazes com agentes quelantes. DFX e C1 atuaram mais rapidamente que C4 em solução, mas C1 e C4 foram mais eficientes na remoção de ferro intracelular. Apesar da curta duração do tratamento, C4 apresentou tendência à redução da ferritina e da deposição hepática, sugerindo eficácia in vivo. Estudos prolongados estão em andamento para melhor elucidar a ação de C1 e C4.