VALIDAÇÃO DA SONDA SRY PARA ESTUDO DE QUIMERISMO SEXUAL EM TRANSPLANTADOS DE MEDULA ÓSSEA UTILIZANDO A METODOLOGIA DE FISH AUTOMATIZADO

A determinação do quimerismo sexual pós-transplante de células-tronco hematopoiéticas (TCTH) é fundamental para o monitoramento da enxertia, sendo realizada por STR, cariótipo e FISH, os quais constituem os principais métodos atualmente empregados, sendo a análise de FISH realizada por leitura manual. Diante dos avanços em sondas moleculares e sistemas de análise automatizada, foi proposta a validação do FISH XY com a sonda SRY (que analisa as regiões do centrômero do cromossomo X, o gene SRY e a heterocromatina do cromossomo Y) em 100, 200 e 300 núcleos interfásicos, com leitura automatizada. O objetivo foi estabelecer valores de referência para detecção de quimerismo em pacientes submetidos a TCTH de doadores do sexo oposto, correlacionando os achados com STR e cariótipo. Foram analisadas 22 amostras de pellets de medula óssea: 10 de indivíduos controles e 12 de pacientes pós-TCTH, previamente caracterizados quanto ao quimerismo (quimerismo completo, parcial ou perda de quimerismo) por STR e cariótipo. A validação considerou critérios como eficiência de hibridação, intensidade de sinal, reprodutibilidade, especificidade e sensibilidade analítica ≥ 98%. A leitura automatizada demonstrou alta concordância com os métodos convencionais (FISH manual e STR), evidenciando robustez analítica, sendo a leitura de 100 núcleos interfásicos satisfatória para detecção do quimerismo. Foram definidos parâmetros de leitura, valores de referência para sinais inespecíficos e o critério de positividade baseado na detecção de ≥ 1 núcleo com sinal do sexo oposto. A comparação com o padrão manual atualmente utilizado confirmou a acurácia do protocolo. Assim, a metodologia FISH XY automatizada para detecção de quimerismo em interfase foi validada, sendo considerada segura e aplicável na rotina clínica.