VALIDAÇÃO DE TUBO LIOFILIZADO PARA DETECÇÃO DE CLONE HPN EM NEUTRÓFILOS E MONÓCITOS POR CITOMETRIA DE FLUXO DE ALTA SENSIBILIDADE

A hemoglobinúria paroxística noturna (HPN) é uma doença clonal adquirida da célula-tronco hematopoética causada por mutações somáticas no gene PIGA, localizado no cromossomo X. Essa alteração leva à deficiência de glicosilfosfatidilinositol (GPI), um glicolipídio responsável pela ancoragem de diversas proteínas reguladoras da superfície celular, como CD55 e CD59. A ausência parcial ou completa dessas proteínas torna as hemácias suscetíveis à lise mediada pelo complemento, resultando em hemólise intravascular crônica, frequentemente associada a citopenias e eventos trombóticos. A citometria de fluxo com marcador FLAER, associada a anticorpos monoclonais para proteínas GPI-dependentes, é considerada o método de referência para detecção de clones HPN, especialmente em protocolos de alta sensibilidade. Tubos secos (liofilizados) contendo esses reagentes podem oferecer vantagens de padronização, estabilidade e praticidade, favorecendo sua adoção na rotina diagnóstica. Validar o desempenho de um tubo seco de cinco cores no diagnóstico de HPN, comparando-o com o painel líquido atualmente utilizado. Foi avaliado o tubo customizado Duraclone® (Lucid, Beckman-Coulter) contendo FLAER–Alexa Fluor 488, CD157–PE, CD64–APC-A750, CD15–PB e CD45– Krome Orange. O desempenho foi comparado a um painel líquido de sete cores composto por FLAER, CD24, CD45, CD14, CD33, CD15 e CD157. Foram analisadas amostras de dez indivíduos (5 controles normais e 5 pacientes com HPN confirmada). As aquisições foram realizadas no citômetro FACLyric (BD Biosciences), com aquisição de 500.000 leucócitos por amostra para avaliação de alta sensibilidade. A análise estatística comparativa entre os dois métodos não revelou diferenças significativas em nenhuma das variáveis avaliadas (p ≥ 0,05), incluindo as populações totais de granulócitos, monócitos, eosinófilos, basófilos e linfócitos, bem como as frações correspondentes a clones HPN tipos II e III. As médias obtidas para cada parâmetro foram semelhantes entre o tubo líquido e o tubo seco, confirmando equivalência na detecção e quantificação de clones HPN e das populações leucocitárias associadas. O uso de tubos secos apresenta diversas vantagens para a rotina diagnóstica. A padronização do ensaio, com quantidade e proporção fixas de anticorpos, reduz a variabilidade técnica e os erros de preparo. A maior estabilidade dos reagentes, muitas vezes com armazenamento em temperatura ambiente, diminui a dependência da cadeia de frio e amplia a vida útil dos testes. O preparo simplificado acelera o processamento, libera recursos humanos e reduz riscos de contaminação ou degradação. Além disso, a logística de transporte e armazenamento é otimizada, e há redução de custos indiretos relacionados a repetição de testes ou desperdício de reagentes. Esses fatores, associados ao desempenho equivalente demonstrado neste estudo, reforçam o potencial do tubo seco como alternativa viável e eficiente para detecção de clones HPN, inclusive em protocolos de alta sensibilidade. O tubo seco avaliado demonstrou equivalência analítica ao painel líquido tradicional na detecção de HPN em granulócitos e monócitos, incluindo clones de diferentes intensidades de deficiência. Sua adoção pode simplificar o fluxo de trabalho, reduzir variabilidade interlaboratorial e otimizar recursos em laboratórios de citometria de fluxo.