IMPACTO TRANSCRIPTÔMICO DO SILENCIAMENTO DE RHOA OU RHOC EM CÉLULAS DE LMA

As RHO GTPases RHOA e RHOC são proteínas essenciais envolvidas na regulação do citoesqueleto e motilidade celular, influenciando processos como migração, adesão e controle do ciclo celular. A expressão desregulada dessas proteínas têm sido associada à proliferação e metástase em diversos cânceres, incluindo neoplasias hematológicas. Embora altamente homólogas, RHOA e RHOC desempenham funções distintas em células hematopoiéticas, evidenciando a especificidade destas proteínas. Investigar as funções específicas de RHOA ou RHOC em células de leucemia mieloide aguda OCI-AML 3 através de análise do transcriptoma. A ferramenta de silenciamento gênico baseada em lentivírus (shRNA) foi utilizada para silenciar as células OCI-AML3 para RHOA ou RHOC por meio de um lentivírus específico. Células transduzidas com um lentivírus controle (shCTRL) foram utilizadas para comparação. A análise global de expressão gênica (RNA-seq) foi realizada nas linhagens celulares silenciadas para explorar as vias de sinalização associadas a esses genes. As análises bioinformáticas geraram uma lista de genes diferencialmente expressos (DEGs) definidos como estatisticamente significativos em p < 0,05 (FDR ≤ 0,05). O silenciamento de RHOA resultou em 165 genes diferencialmente expressos (100 regulados positivamente e 65 negativamente), enquanto o silenciamento de RHOC levou à alteração de 48 genes (15 regulados positivamente e 33 negativamente). Ao todo, 14 genes foram encontrados desregulados em comum nas duas condições. O perfil transcriptômico indicou a modulação de mecanismos adaptativos para a manutenção da sobrevivência das células leucêmicas frente ao estresse provocado pelo silenciamento destas proteínas. A análise de enriquecimento funcional revelou que RHOA e RHOC modulam vias associadas à proliferação celular, metabolismo, estresse oxidativo, e inflamação. A regulação diferencial de genes associados à reorganização do citoesqueleto evidencia o papel central de RHOA e RHOC em células mieloides. Entre os genes diferencialmente expressos, destaca-se FMNL1, um regulador fundamental da morfogênese celular e da polimerização da actina, que interage com GTPases da família RHO e integra redes regulatórias relacionadas a processos críticos na leucemia. Nossos dados indicam que RHOA e RHOC desempenham funções distintas por meio da regulação de redes gênicas específicas em células mieloides. O silenciamento dessas proteínas ativa mecanismos adaptativos para manutenção da sobrevivência celular, evidenciando sua influência em células leucêmicas. Esses achados ampliam o entendimento dos papéis específicos de RHOA e RHOC na leucemia mieloide aguda e contribuem para a elucidação dos mecanismos moleculares envolvidos na patogênese da doença.