EFEITOS DO SILENCIAMENTO DE RHOB NA PROLIFERAÇÃO DE CÉLULAS MIELOIDES

RHOB é uma proteína pertencente à subfamília RHO de GTPases, que controla a dinâmica do citoesqueleto. Apesar da alta homologia com as outras proteínas de sua subfamília (RHOA e RHOC) RHOB tem demonstrado funções únicas, muitas vezes associadas à supressão de diferentes tipos de tumores. Porém, há poucos estudos sobre a função de RHOB em neoplasias hematológicas. Neste estudo investigamos o efeito do silenciamento de RHOB na capacidade de proliferação clonal da linhagem celular mieloide OCI-AML3. Células OCI-AML3 foram silenciadas através de transdução com lentivírus para RHOB (shRHOB) ou lentivírus controle (shCTRL). A efetividade do silenciamento foi verificada por RT-qPCR. A expressão de RHOA e RHOC foi investigada por RT-qPCR e western blot. O crescimento celular foi avaliado através de contagem das células cultivadas sob as mesmas condições por 7 dias. Adicionalmente, avaliou-se a proliferação clonal através de cultivo celular em meio semissólido contendo metilcelulose por 10 dias. As colônias formadas foram contadas sob microscópio invertido. Houve redução de aproximadamente 60% na expressão gênica de RHOB nas células OCI-AML3 shRHOB em comparação com as células shCTRL. Interessantemente, observamos aumento da expressão gênica e proteica de RHOA e RHOC nas células silenciadas para RHOB. Não houve diferença significativa entre a proliferação de células silenciadas para RHOB e controle (em meio líquido ou em meio semissólido). O aumento da expressão de RHOA e RHOC após o silenciamento de RHOB sugere um possível mecanismo compensatório entre as GTPases da subfamília RHO em células mieloides. Embora RHOB seja descrita como supressora tumoral em diferentes contextos, nossos resultados indicam que sua inibição isolada não impacta de forma significativa a proliferação ou a capacidade clonogênica da linhagem OCI-AML3. É possível que o efeito antitumoral atribuído a RHOB em outros modelos dependa de interações específicas com vias de sinalização ou contextos celulares distintos. CAPES, FAPESP.