ANÁLISE PROTEÔMICA NA RETINA DE CAMUNDONGOS HBSS-TOWNES: IDENTIfiCAÇÃO DE ALVOS PROTEICOS NA RETINOPATIA FALCIFORME

A retinopatia falciforme é a manifestação ocular mais importante na doença falciforme. Em sua forma proliferativa, a neovascularização é proveniente da ativação endotelial, de cascatas tromboinflamatórias e de agregação de hemácias falcizadas, com consequente vaso-oclusão e hipóxia na microvasculatura retiniana. Estágios avançados se caracterizam pela hemorragia vítrea e, por fim, pelo descolamento de retina, com perda visual em 10 a 20% dos olhos afetados. Identificar proteínas diferencialmente abundantes (PDAs) a partir da análise de proteômica em retinas de camundongos humanizados HbSS-Townes, com o intuito de obter vias moleculares e alvos proteicos de relevância terapêutica para a complicação. Foram utilizados camundongos fêmeas com oito meses de idade das linhagens C57BL/6J (controles) e HbSS-Townes (N=14/grupo). Caracterização: A atividade da retina foi avaliada através da eletroretinografia (ERG) (Roland RETIport), para respostas em condições escotópicas (flashes de -3.7, -2.7, -1.7, -0.7 e 0.3 log cd.s/m²) e fotópicas (flashes de 0.3 log cd.s/m²). Parâmetros hematológicos e bioquímicos foram mensurados. A morfologia retiniana foi avaliada por coloração de hematoxilina e eosina (HE), além da imunolocalização de fatores angiogênicos (Vegf) e de hipóxia (Hif2). As retinas foram isoladas dos globos oculares para extração de proteínas. Proteoma: O equipamento LTQ Orbitrap Velos foi utilizado para o sequenciamento proteico. A montagem, normalização e quantificação das proteínas foram realizadas com o software MaxQuant. O ShinyGO foi utilizado para o enriquecimento funcional das proteínas diferencialmente abundantes (PDAs). Os camundongos Townes apresentam anemia, hemólise e esplenomegalia. No ERG, não foram observadas diferenças estatisticamente significativas entre os grupos nas respostas escotópicas e fotópicas. A morfologia retiniana mostrou um aumento significativo (p < 0,05) no número de vasos sanguíneos na camada de células ganglionares, bem como da marcação de Vegf e Hif2. Na análise proteômica, foram identificadas 267 PDAs (63 com expressão aumentada e 205 com expressão reduzida), com enriquecimento em processos relacionados à fototransdução, via de sinalização do HIF-1, via de sinalização do VEGF e vias associadas a doenças neurodegenerativas. Os camundongos Townes reproduzem o fenótipo da anemia falciforme, sendo um relevante modelo para estudos pré- clínicos. Apesar da ausência de diferenças eletrofisiológicas entre os grupos, a morfologia retiniana e o perfil proteômico são consistentes com achados anteriores de alterações isquêmicas na retina desses animais. O enriquecimento das vias de sinalização do HIF-1 e do VEGF, associadas respectivamente à isquemia e à angiogênese, reitera a relevância desses processos na fisiopatologia da complicação. Além disso, proteínas da família das fosfodiesterases 6 (Pde6) apresentaram expressão proteica reduzida no processo de fototransdução. Essas enzimas atuam na via de sinalização de fotorreceptores, sendo relacionadas a doenças com degeneração retiniana, como a retinite pigmentosa. Portanto, os resultados obtidos destacam alterações em vias moleculares relacionadas à neovascularização e degeneração retiniana, possibilitando a identificação de alvos proteicos como potenciais biomarcadores e alvos terapêuticos.