Effect of transforming growth factor beta 1 on the proliferation, migration and endothelial-to-mesenchymal transition of infantile hemangioma-derived endothelial cells

摘要： 【摘要】 目的 研究转化生长因子β1（TGF-β1）对婴幼儿血管瘤（IH）内皮细胞（HemEC）生物活性的影响。方法 收集2021年2 - 8月在四川大学华西医院小儿外科行手术切除治疗的增殖期及消退期IH组织各3份，从增殖期IH组织中提取原代HemEC，以人脐静脉内皮细胞（HUVEC）为对照，通过免疫组化与Western印迹法分别检测TGF-β1在组织与细胞中的表达水平。采用细胞增殖毒性检测试剂盒（CCK8）检测0（对照组） ~ 100 ng/ml TGF-β1对HemEC细胞增殖的影响。采用5 ng/ml TGF-β1处理HemEC，以未接受TGF-β1处理为对照组，Transwell实验观察细胞迁移能力，免疫荧光检测内皮标志物血小板-内皮细胞黏附分子（CD31）、血管内皮钙黏蛋白（VE-cadherin）及间质标志物α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ型胶原α1（COL1A1）的表达变化。组间比较采用两独立样本t检验或单因素方差分析。结果 免疫组化结果显示，增殖期IH组织TGF-β1染色阳性且表达相对丰富，阳性信号面积占比为24.68% ± 3.74%，而消退期IH组织中几乎不表达TGF-β1。Western印迹实验显示，HemEC中TGF-β1相对表达水平（1.08 ± 0.13）高于HUVEC（0.30 ± 0.04，t = 9.93，P < 0.001）。CCK8实验显示，3.125、6.25、12.5、25、50、75 ng/ml TGF-β1组HemEC增殖活性均高于对照组（均P < 0.05），而100 ng/ml TGF-β1组与对照组细胞增殖活性差异无统计学意义（P > 0.05）。Transwell实验显示，5 ng/ml TGF-β1组细胞迁移数［（127 ± 6）个］高于对照组［（103 ± 9）个］，t = 5.32，P < 0.01。HemEC免疫荧光检测显示，5 ng/ml TGF-β1组CD31、VE-cadherin荧光强度（5.441 ± 1.254、5.073 ± 0.412）均低于对照组（9.518 ± 1.728、7.671 ± 0.921），差异有统计学意义（t = 3.31、4.46，P = 0.030、0.011）；α-SMA、COL1A1荧光强度（8.074 ± 0.846、5.885 ± 0.216）高于对照组（0.393 ± 0.342、0.295 ± 0.125），差异有统计学意义（t = 14.58、38.76，P < 0.001、 < 0.000 1）。结论 TGF-β1在增殖期IH组织与HemEC中高表达，并可促进HemEC增殖、迁移及内皮间质转化。