The antioxidant Tempol inhibits pigment loss in tail skin of a mouse model of immune-induced vitiligo under oxidative stress

摘要： 【摘要】 目的 探索抗氧化剂Tempol对内源性活性氧（ROS）生成剂AAPH联合酪氨酸酶相关蛋白2（TRP2）-180九肽免疫诱导白癜风小鼠皮肤色素脱失的影响。方法 用TRP2-180九肽混合物免疫注射小鼠足垫2次和尾部皮肤2次，注射间隔为1周，建立白癜风样皮肤脱色斑模型。首次免疫注射后，将12只免疫诱导白癜风小鼠分为模型组、AAPH组、Tempol组和联合处理组（每组3只），另取未处理小鼠3只注射卵清蛋白（OVA）257-264多肽，建立假模型组；其中AAPH组、Tempol组和联合处理组分别予AAPH尾部皮下注射和/或Tempol腹腔注射，模型组和假模型组于腹腔和/或尾部注射磷酸盐缓冲液，干预每周3次，连续3周。末次免疫注射后6周处死小鼠，用点计数法测算尾部脱色斑面积，用X-gal染色和双重免疫荧光染色检测小鼠尾部脱色斑皮肤中黑素细胞、肥大细胞和CD8+ T细胞分布及数目。将HaCaT细胞与AAPH和/或Tempol体外共培养，以常规培养组作为对照组，采用荧光探针标记结合流式细胞仪测定细胞内ROS水平，采用Western印迹法检测细胞裂解物中基质金属蛋白酶9（MMP9）和干细胞因子（SCF）以及培养基上清液中可溶性SCF的蛋白表达水平。多组间比较采用单因素方差分析，两两多重比较采用LSD-t检验。结果 除假模型组外，余4组小鼠尾部均出现脱色斑。AAPH组鼠尾脱色斑面积［（7.27 ± 0.31） cm2］显著大于模型组和联合处理组［（3.53 ± 0.21） cm2、（4.07 ± 0.40） cm2；t = 13.48、11.56，均P＜0.001），Tempol组［（3.30 ± 0.40） cm2］与模型组相比脱色斑面积差异无统计学意义（P = 0.424）。X-gal染色和双重免疫荧光染色结果显示，AAPH组和联合处理组脱色斑周围正常皮肤黑素细胞数目均显著低于模型组（t = 6.31、5.16，均P＜0.001），AAPH组与联合处理组间差异无统计学意义（P = 0.516）；AAPH组CD8+ T细胞和肥大细胞数目均显著高于模型组和联合处理组（均P < 0.001）；Tempol组3种细胞数目与模型组相比差异均无统计学意义（均P > 0.05）。AAPH组HaCaT细胞内ROS水平最高，显著高于对照组和联合处理组（均P < 0.001）。Western印迹法示，AAPH组细胞裂解物中MMP9水平和培养基上清液中可溶性SCF水平均显著高于对照组和联合处理组（均P < 0.05）；各组细胞裂解物中膜结合型SCF水平差异无统计学意义（F = 0.06，P = 0.977）。结论 抗氧化剂Tempol可抑制AAPH诱导氧化应激状态下白癜风样模型小鼠皮肤脱色斑的生成。