Effect of IDO1 on functional changes in macrophages in vaginal tissues from mouse models of vulvovaginal candidiasis

摘要： 【摘要】 目的 通过调控吲哚胺2，3-双加氧酶（IDO1）观察外阴阴道念珠菌病（VVC）小鼠模型中巨噬细胞功能的变化。方法 40只无特定病原级雌性ICR小鼠按完全随机法分为4组：空白组、VVC模型组、VVC模型 + 1-甲基色氨酸组（简称1-MT组）、VVC模型 + γ干扰素组（简称IFN-γ组），每组10只。除空白组外，在造模前6 d，每隔1天予小鼠腹部皮下注射苯甲酸雌二醇油剂诱导假发情；发情成功后开始建模，继续皮下注射苯甲酸雌二醇油剂，予小鼠阴道接种2 × 109 CFU/ml白念珠菌菌悬液，每天1次，连续5 d；1-MT组和IFN-γ组分别在接种菌悬液前1 d予1-MT或IFN-γ预处理，之后每天1次，连续干预6 d；空白组和VVC模型组给予相应的生理氯化钠溶液。在造模第5天时，观察小鼠阴道情况，并进行阴道症状评分；收集阴道灌洗液涂片镜检和真菌载荷计数；随后处死小鼠，收集阴道组织，分别进行苏木精-伊红（HE）染色及过碘酸希夫（PAS）染色，免疫荧光法检测组织中IDO1和巨噬细胞表面标志物F4/80的表达；实时荧光定量PCR（qPCR）检测组织中IDO1、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、精氨酸酶1（Arg-1）mRNA表达水平，Western印迹检测组织中IDO1蛋白表达。采用单因素方差分析检验组间各指标的差异，Tukey检验进行两两多重比较。结果 造模第5天，小鼠阴道灌洗液涂片镜检，VVC模型组中菌丝细长，见少量孢子；1-MT组大量细长菌丝聚集成团，周围可见孢子；IFN-γ组见少量细短菌丝，孢子较多。小鼠阴道灌洗液载菌量计数显示，与VVC模型组载菌量（360.0 ± 15.9）相比，1-MT组较高（523.7 ± 67.7，P = 0.002），而IFN-γ组较低（258.3 ± 27.6，P = 0.026）。HE染色和PAS染色显示，VVC模型组表皮局灶可见小脓肿形成，表皮及真皮全层见以中性粒细胞为主的炎症细胞浸润，且存在大量孢子，伴少量菌丝；1-MT组表皮增生、增厚，真皮可见大量以中性粒细胞为主的炎症细胞弥漫性浸润，表皮及真皮全层大量菌丝和孢子聚集成团，以菌丝为主；IFN-γ组表皮聚集孢子，未见明显菌丝，真皮见少量以中性粒细胞为主的炎症细胞浸润。免疫荧光检测显示，IFN-γ组IDO1相对荧光强度最高，而1-MT组F4/80相对荧光强度最高。Western印迹结果显示，VVC模型组IDO1蛋白表达显著高于空白组（P＜0.001）和1-MT组（P＜0.05），低于IFN-γ组（P＜0.05）。qPCR检测显示，VVC模型组iNOS mRNA表达高于空白组（P＜0.01），IFN-γ组高于空白组、VVC模型组和1-MT组（均P＜0.001）；VVC模型组Arg-1 mRNA表达显著高于空白组（P＜0.001）及IFN-γ组（P＜0.01），1-MT组显著高于空白组、VVC模型组和IFN-γ组（均P＜0.001）。结论 在VVC小鼠模型中上调IDO1可能引起巨噬细胞向M1极化，抑制IDO1引起巨噬细胞募集增多，炎症反应加剧。