Selection of reference genes for gene expression analysis by RT-qPCR in Robinia pseudoacacia L. under drought conditions

obinia pseudoacacia L., or black locust, is a valuable tree species known for its rapid growth in drought conditions. Due to its adaptation to diverse climates, R. pseudoacacia is widely used in agroforestry to combat soil erosion, restore land, strengthen sand, and increase pasture productivity. However, to effectively utilize R. pseudoacacia in drought conditions, it is essential to understand the molecular mechanisms underlying its adaptation to this stressor. One of the key tools for investigating these mechanisms is reverse transcription quantitative real-time polymerase chain reaction (RT-qPCR). To achieve accurate results, it is crucial to select appropriate reference genes to normalize the expression data of genes involved in stress response. The aim of this study is to identify the most suitable reference genes for quantitative gene expression analysis in R. pseudoacacia using RT-qPCR. An analysis was performed via RT-qPCR to evaluate the stability of expression of several housekeeping genes under simulated soil drought in laboratory conditions. Based on gene expression stability data analyzed with RefFinder, one gene was identified as the most stable under drought conditions. Results from various algorithms indicated that ACT_v2 is the most stable reference gene for R. pseudoacacia under drought conditions, while ACT_v1showed the least stability Робиния псевдоакация (Robinia pseudoacacia L.) – ценная древесная порода, быстро растущая в засушливых условиях. Благодаря адаптации к различным климатическим условиям она широко используется в агролесомелиорации для борьбы с эрозией почв, восстановления земель, укрепления песков и повышения пастбищной продуктивности. Однако, для эффективного использования R. pseudoacacia в условиях засухи необходимо понимать молекулярные механизмы ее адаптации к данному стрессовому фактору. Одним из ключевых инструментов для исследования этих механизмов является метод полимеразной цепной реакции в реальном времени с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР-РВ). Для достижения высокоточных результатов важно подобрать референсные гены, которые необходимы для нормализации данных экспрессии генов, ответственных за стрессовые реакции. Цель данной работы – отобрать наиболее подходящие референсные гены для количественного анализа экспрессии генов R. Pseudoacacia с помощью ПЦР в реальном времени. С помощью метода ОТ-ПЦР-РВ проведено исследование стабильности экспрессии нескольких генов домашнего хозяйства в условиях моделирования почвенной засухи в лабораторных условиях. На основе данных об экспрессии изучаемых генов с помощью инструмента RefFinder был выбран один наиболее стабильный в условиях засухи ген. Результаты, полученные различными алгоритмами, показали, что ACT_v2является наиболее стабильным референсным геном R. pseudoacacia в условиях засухи, в то время как ACT_v1 продемонстрировал наименьшую стабильность.